Определение абразивного воздействия на эмаль зубной пасты на основе биоактивного стекла 45S5 в зависимости от размера и формы частиц стекла.
Методы: 45S5 стекло было измельчено и просеяно с получением фракций разных размеров: < 38, 38-63 и 63-110 микрон. Для измельчения были использованы два метода: с помощью ударной дробилки и шаровой мельницы. На основе измельченного стекла были изготовлены зубные пасты, а их абразивность во время чистки зубов измеряли в соответствии со методикой стандарта BS EN ISO11609. Результаты: с увеличением размера частиц стекла увеличивается степень стираемости эмали. Частицы порошка, полученного с помощью ударной дробилки, имеют острые края, а пасты на их основе обладают гораздо большей абразивностью, чем пасты на основе округлых частиц порошка, полученного с помощью шаровой мельницы. В ходе данного исследования было обнаружено одно интересное наблюдение: стираемость эмали особенно выражена на эмалево-дентинной границе (ЭДГ), особенно при использовании паст с крупными частицами. (Am J Dent 2014;27:263-267).
Клиническая значимость:2000 циклов чистки (что по нашим оценкам эквивалентно чистке зубов на протяжении 3 лет) с использованием существующих паст с определенным диапазоном частиц биостекла, приводит к истиранию эмали на толщину < 20 микрон. Исходя из этого, в вопросе абразивности данных паст нет существенной проблемы. Тем не менее, желательно исключить любое абразивное воздействие на эмаль, и этому может способствовать уменьшение частиц биостекла в составе зубных паст.
Введение
Биоактивное стекло 45S5 состоит из 46.1 молей SiO2, 2.6 молей P2O5, 26.9 молей CaOи 24.4 молей Na2O. Оно было введено в состав паст, предназначенных для лечения гиперчувствительности дентина (ГД) и реминерализации эмали. Данное стекло распространяется под торговой маркой NovaMin. Обычно в зубной пасте содержится от 5 до 10 весовых процентов стекла. Размер частиц стекла имеет большой разброс, со значительной долей частиц (>10%) размером менее 3 мкм, что соответствует размеру дентинных канальцев. Кроме того, в составе есть крупные частицы (<90 мкм), которые обеспечивают длительное высвобождение ионов Ca²⁺ и PO4³⁻.
Частицы стекла растворяются в слюне, высвобождая ионы Ca²⁺ и PO4³⁻, и как полагают, образуют карбонат гидроксиапатита (КГА) на поверхности зуба и внутри дентинных канальцев.
Эти новые зубные пасты на основе NovaMin показали свою клиническую эффективность в лечении ГД5, и могут стать более эффективными в применении по сравнению с методами, в которых для запечатывания дентинных канальцев в первую очередь используется карбонат кальция, так как КГА меньше подвержен растворению кислотами, чем карбонат кальция. Высвобождающиеся ионы Ca²⁺ и PO4³⁻ способствуют реминерализации очагов начального кариеса, а также имеют другие потенциальные полезные свойства, в том числе препятствуют развитию гингивита.
Тем не менее, одним из возможных недостатков NovaMin является стекло 45S5, основной компонент NovaMin, твердость которого - около 4.68 Гпа, что значительно превышает твердость эмали – около 3,5 ГПа. Следовательно, во время чистки эти новые пасты на основе NovaMin могут вызывать истирание эмали. Это вызывает особое беспокойство, поскольку есть косвенные доказательства, что по крайней мере частично ГД может быть вызвана чрезмерно активной чисткой зубов21. К тому же, ГД наиболее выражена в пришеечной области, где эмаль наиболее тонкая и, кроме того, эмаль, расположенная ближе к ЭДГ более мягкая 22-24 и следовательно, легче всего истирается.
В рамках данного исследования были рассмотрены абразивные свойства стекла 45S5 в зависимости от размера и формы его частиц в отношении эмали и дентина, с целью лучшего понимания относительной значимости данных параметров, а также обеспечения возможности создания зубной пасты на основе биостекла, которая обладала бы меньшей абразивностью.
Таким образом, поскольку эмаль образует наружную поверхность зуба и в большей степени подвержена чистке, особенно в случаях чрезмерно активной чистки зубов, то основное внимание в данном исследовании уделялось истиранию эмали. Такое травмирующее воздействие может привести к удалению слоя эмали и обнажению дентина, что может стать причиной ГД.
Материалы и Методы
Синтез стекла – смеси SiO2b, P2O5c, CaCOc и NaCOc были расплавлены в платинородиевом тигле в течение 1 часа при температуре 1,380°C в электрической печи (EHF 17/3d). Размер одной порции материала составил 200 грамм. После плавления стекло быстро погружалось в воду для предотвращения кристаллизации. После просушивания стекло было измельчено. Аморфная структура стекла подтверждалась с помощью порошковой рентгеновской дифракции (XRD; 40 kV/40 mA, CuKa, данные получены при комнатной температуре).
Измельчение стеклянной фритты – для измельчения фритты были использованы два разных метода: с помощью ударной дробилки (Gyromillf), известной также как «puckmill», и с помощью шаровой мельницы.
Основной принцип работы ударной дробилки основан на ударном разрушении стеклянной фритты на мелкие частицы. Полученные таким методом частицы имеют угловатую, неправильную форму с острыми краями. Второй метод измельчения – с помощью шаровой мельницы: вращающийся цилиндр частично заполнен шариками из оксида алюминия, материал измельчается за счет трения и редких ударов о вращающиеся шарики. В этом случае полученные частицы имеют относительно округлую форму.
Ударное измельчение поводилось с использованием сосуда объемом 250 мл со 100 г стеклянной фритты в два приема по 7 минут с настройкой ударной дробилки на максимальную амплитуду. Шаровое измельчение проводилось с использованием сосуда объемом 2 л со 100 г фритты и 30 г шариков из оксида алюминия с 30-граммовой нагрузкой шариков в течение 24 часов.
Таблица 1. Разные партии зубных паст.
Подготовка зубных паст – Зубная паста содержит в своем составе активные и неактивные компоненты, неактивные компоненты являются неотъемлемой частью состава пасты. Существуют следующие неактивные компоненты: связующие, смачивающие, моющие, абразивные вещества, отдушки и красители. Состав зубной пасты с 10% весовым содержанием стекла 45S5 был запатентован в США – патент US 2009/032451625. Ее состав был несколько изменен. В него входят глицерин, карбопол, являющийся полиакриловой кислотой (молекулярная масса около 45,000), ПЭГ400 - полиэтиленгликоль, добавленный с целью уменьшения липкости и придания пасте гладкой текстуры, а также Syloid 244FP – диоксид кремния, используемый в качестве загустителя. В качестве подсластителя был использован ацесульфам калия, и для придания блеска зубной пасте – диоксид титана.
В оригинальном запатентованном составе; также присутствует абразивный компонент - Syloid 63, основой которого является кремний. Он был исключен из состава, так как в роли абразивного компонента было достаточно наличия стекла 45S5.
Ингредиенты были взвешены и смешаны в пластиковом контейнере емкостью 100 мл. Стекло 45S5 добавляли последним, затем тщательно перемешивали ингредиенты до получения однородной массы зубной пасты. Было изготовлено 5 партий зубных паст с различным размером частиц биоактивного стекла (таблица 2).
Подготовка образцов зубов. - Для исследования были использованы удаленные интактные премоляры нижней и верхней челюсти. Зубы были предоставлены банком зубов больницы Ройал Лондон Дентал с одобрения этического комитета (QMREC 2011/99). Зубы хранили в 1% растворе гипохлорита натрия. Сначала зубы были погружены в акриловую смолу в горизонтальном положении, с выступающей вверх вестибулярной поверхностью, таким образом были изготовлены блоки размерами 3×3×2 см. Затем вестибулярную поверхность сошлифовывали абразивным диском до получения плоской и гладкой поверхности эмали. После этого производилась полировка поверхности с помощью алмазных полиров с зернистостью 3,1 и 0,25 мкм. Затем окончательно отполированные вестибулярные поверхности были погружены в акриловые блоки. На каждый образец с помощью турбинного наконечника и алмазного бора диаметром 1,6 мм было нанесено два отверстия полусферической формы. Данные отверстия были нанесены несколько ниже области эмалево-дентинной границы, а также в области неочищенной щеткой плоской поверхности, что послужило системой координат для регистрации парных поверхностей (до и после чистки щеткой). Для исследования каждой зубной пасты было использовано по 4 премоляра.
Анализ размера частиц - Для анализа размера частиц использовали анализатор размера частиц Malvern (Malvern Mastersizerj). Этот анализатор работает на явлении лазерной дифракции и основан на принципе, согласно которому частицы, проходящие через лазерный луч, будут рассеивать свет.
Таблица 2. Состав зубной пасты.
Анализ СЭМ (анализ растровым электронным микроскопом). Проводилось сравнение стеклянного порошка, измельченного с использованием ударной дробилки и шаровой мельницы, с помощью SEM. Для качественной оценки размера и формы частиц образцы рассматривались с помощью СЭМ (JCM-500k).
Профилирование – Для оцифровки поверхности использовался 3-D сканер. Данный инструмент обладает высокими динамическими характеристиками, небольшими погрешностями сканирования и низкой контактной силой. Кончик контактного зонда, которым производится исследование поверхности образца, представляет собой сферу диаметром 1 мм, состоящую из промышленного рубина. Интервал сканирования в данном эксперименте составил 0,05 мм, а скорость движения зонда была установлена на 400 мм/с. Образцы зубов до и после чистки были оцифрованы с помощью этого инструмента.
Анализ образцов проводился с использованием программного обеспечения для анализа трехмерных изображений (Cloudm). Подбор схожих по строению областей двух полусфер позволял проводить сравнение изображения до и после чистки. Необходимо было определить степень убыли толщины ткани в области чистки с использованием зубной пасты. Было выполнено 4 измерения в области центральной части эмали (вдали от ЭДГ) и в области эмалево-дентинной границы.
Чистка образцов щеткой - после подготовки и профилирования образцов, они были подвержены чистке с помощью автоматической щеточной машины с 10 чистящими станциями. Каждый акриловый блок с погруженной в него частью зуба был прочно закреплен на каждой станции. В эксперименте были использованы, плоские щетки средней степени жесткости, с закругленными концами щетин. Около 1 мм зубной пасты было нанесено на щетку, при этом образец располагали таким образом, чтобы направление чистящих движений щеткой было параллельно корню закрепленного в блоке зуба. Сила давления составила 200 грамм. Щеточная машина была запрограммирована на выполнение 2 000 циклов чистки, после чего на щетку наносилась свежая порция зубной пасты (1 мл). По завершении 20 000 чисток, образцы, снятые со станций, были промыты водой, а затем снова профилированы для определения степени износа эмали и дентина на каждом образце. В основе выбранных типа щеточной машины и протокола проведения чистки, лежит метод BSENISO11609. Однако, обратите внимание, что данные стандарты направлены на изучение стираемости дентина, в то время как с клинической точки зрения более важен вопрос стираемости эмали, поскольку она формирует внешний слой зуба, который подвержен чистке зубов щеткой.
Дизайн исследования и статистические методы – Дизайн исследования был выбран таким образом, чтобы получить распределение частиц большего и меньшего размера, чем в составе пасты NovaMin, с целью получения значимой степени стираемости и выраженных различий результатов. Кроме того, чтобы облегчить получение измеримого износа эмали, использовалось высокое содержание стекла в зубной пасте (10% по весу). Обычно в коммерческих пастах содержится от 2,5 до 10 весовых процентов NovaMin. Кроме того, для получения измеримой степени стираемости, было использовано 20 000 циклов чистки с силой давления щетки, равной 200 г. Для определения среднего и стандартного отклонений на каждом из 4 зубов было проведено 4 измерения, итого было выполнено 16 измерений. Доверительный интервал на графиках представляет собой удвоенное значение стандартного отклонения. Поскольку величина ошибки мала, и полученные данные и соответствующие доверительные интервалы не пересекаются, проведение статистических тестов для демонстрации статистической значимости не требовалось.
Рисунок 1. СЭМ-изображение стекла B. Присутствуют многочисленные частицы стекла размером менее 38 мкм.
Рисунок 2. СЭМ-изображение стекла А. Видно, что мелкие частицы стекла прилипают к более крупным частицам, а также имеются рыхлые агломераты мелких частиц.
Таблица 3. Распределение размера частиц в партиях.
В таблице 3 представлены результаты анализа размера частиц. Каждая из партий содержит высокую долю частиц размером менее 1 микрона, присутствующую даже в образцах A, B и D, в которых, теоретически, частицы такого размера должны были быть удалены путем просеивания. Все значения D90 были меньше максимальной используемой ячейки сита. Например, стеклянные частицы зубной пасты А были просеяны через сито с размером ячеек 110 мкм, а ее значение D90 - 77,26 мкм. Диапазон размеров частиц стекла экспериментальных паст превысил диапазон размера частиц стекла NovaMin. При этом размер частиц NovaMin– это что-то среднее между размерами частиц образцов B и C, полученных с помощью ударной дробилки и частиц образцов D и E, полученных с помощью шаровой мельницы. Диапазон частиц стекла был выбран таким образом, чтобы имелись частицы как большего, так и меньшего размера, чем в составе NovaMin.
Сканирующая электронная микроскопия стеклянных порошков (рисунки: 1 и 2) показала, что процесс просеивания был не очень эффективным и что маленькие стеклянные частицы имеют тенденцию прилипать к поверхностям более крупных стеклянных частиц во время просеивания. Несмотря на то, что мелкие частицы должны были быть удалены при просеивании через сита с размером ячеек 63 и 38 мкм, в образцах стекла A и Bвизуализируются многочисленные мелкие частицы стекла размером <10 мкм. Присутствие этих мелких частиц объясняет низкие значения D10, наблюдаемые во всех группах стеклянного порошка, это хорошо видно на рисунке 2. Можно также заметить, что наиболее крупные частицы стекла на рисунке 2 больше таковых на рисунке 1, что согласуется со значениями D50 и D90, приведенными в таблице 3, полученными с помощью сканирующей электронной микроскопии по рассеянию света, а также показывает, что при использовании шаровой мельнице получаются гораздо более округлые частицы, чем при ударном измельчении.
Рисунок 3. Цветокодированный снимок двух изображений, полученных на момент окончания чистки. Цвет морской волны, темно-синий и фиолетовый цвета демонстрируют прогрессию износа тканей.
На рисунке 3 показаны данные профилирования образцов, которые были подвержены чистке с использованием пасты А, содержащей самые крупные частицы биоактивного стекла. Визуализируются протяженные бороздки в виде полос, идущих в направлении чистки зубов, слева направо на рисунке 3. Это говорит о том, что крупные частицы стекла с острыми краями в составе пасты способствовали образованию глубоких царапин на поверхности акрила, эмали. и дентина. На трех других образцах группы использования пасты А были менее заметные бороздки, но они были выражены в той или иной степени. Еще один интересный аспект заключался в том, что наиболее выраженная стираемость тканей происходила в области эмалево-дентинной границы (ЭДГ), на рисунке 3 данная область окрашена темно-синим цветом.
Рисунок 4. Износ эмали в микронах в зависимости от размера частиц стекла D50.
На рисунке 4 показан график зависимости средней степени стираемости при применении каждой пасты от размера частиц в отношении каждой пасты в зависимости от размера частиц D50, а на рисунке 5 - средний износ в зависимости от размера частиц D90.
Рисунок 5. Износ эмали в микронах в зависимости от размера частиц стекла D90.
На графиках можно увидеть, что доверительные интервалы малы. На обоих графиках хорошо видно, что стираемость эмали снижается по мере уменьшения размера частиц стекла. Также стираемость ниже в случае применения стекла, измельченного с помощью шаровой мельницы, по сравнению стекла, измельченного с помощью ударной дробилки. Округлая форма частиц, полученных с помощью шаровой мельницы, способствует меньшей степени стираемости, по сравнению с угловатой формой частиц с острыми краями, полученными с помощью ударного измельчения в ударной дробилке. В соответствии с графиком данные о стираемости, сопоставленные с данными в отношении размера частиц D90, интересно экстраполируют до почти нулевой степени стираемости при применении обоих методов измельчения. Напротив, данные о размере частиц D50 экстраполируют до степени стираемости около 21 мкм и 4 мкм для данных, измельченных с помощью ударной дробилки и шаровой мельницы. Эта экстраполяция к нулевой степени истирания эмали при нулевом размере частиц имеет логический смысл, поскольку нулевой размер частиц указывает на отсутствие абразивных частиц. График также предполагает, что, вероятно, именно большие размеры частиц в распределении имеют значение в вопросе абразивности и, вероятно, в значительной степени определяют убыль или истирание эмали.
Обсуждение
При использовании шаровой мельницы, как известно, получаются керамические частицы более округлой формы, чем при использовании ударной дробилки.30 Особенно повышенный износ в области ЭДГ произошел при применении паст с крупными частицами стекла. Есть ряд сообщений 23,24 которые указывают на то, что эмаль в области ЭДГ менее насыщена минералами и значительно мягче, чем эмаль в целом, и, следовательно, подвержена большей стираемости, чем эмаль в целом.
Типичный ежедневный цикл чистки зубов, вероятно, включает не более 20 движений щеткой по одному зубу. Исходя из этого, 20 000 циклов будут соответствовать 1 000 эпизодов чистки зубов, и, если предположить, что за день человек чистит зубы дважды, это будет соответствовать примерно 3 годам чистки. Обычно эмаль зуба в коронковой части имеет толщину 1-2 мм, при условии, что за каждые 3 года происходит стираемость, равная 10 микронам, то для убыли ткани, равной 1 мм, потребуется более 300 лет. В отличие от эмали, расположенной в коронковой части зуба, эмаль в пришеечной его области - намного тоньше и имеет толщину около 50 микрон, и для ее истирания потребуется всего 15 лет. Однако при этом не учитывается тот факт, что эмаль вблизи ЭДГ более мягкая и, вероятно, будет стираться с гораздо большей скоростью, в соответствии с экспериментальными данными. Кроме того, абразивность зубной пасты, вероятно, будет намного выше, если зуб подвергнется эрозивному воздействию, такому как употребление кислых напитков перед чисткой, которые способствуют выходу апатита из твердой фазы и приводят к рязмягчению эмали.
Абразивность зубных паст из биоактивного стекла сама по себе не является серьезной проблемой, тем не менее желательно уменьшить ее абразивные свойства по отношению к эмали, поскольку внешний слой эмали, который фторируется при использовании фтор-содержащей зубной пасты, очень тонкий, и его удаление может способствовать появлению кариеса и кислотной эрозии. Addy21 предположил, что абразивные зубные пасты могут вызывать появление гиперчувствительности дентина, особенно в сочетании с эрозивным воздействием. Результаты показывают, что уменьшение размера частиц, особенно значения D90, снизит абразивность пасты по отношению к эмали. Измельчение частиц до меньшего размера требует повышения материальных затрат для производителя. Гораздо лучше было бы снизить твердость стекла до значения, близкого к твердости эмали. Это может быть достигнуто, например, введением фторида в стекло, что приводит к повышению мягкости стекла, а также к появлению стекла, которое способствует образованию фторапатита, 27,28 который намного прочнее, чем карбонат гидроксиапатита, лежащий в основе стекла 45S5 NovaMin, которое в настоящее время используется в зубных пастах. Существующие данные об эффективности зубных паст на основе NovaMinзаметно снижаются после воздействия кислоты. Добавление фторида в стекло также ускоряет процесс образования апатита и приводит к локальному высвобождению фторида.
В заключение следует отметить, что размер частиц, метод измельчения и их форма сильно влияют на абразивность зубных паст на основе биоактивного стекла. Абразивность увеличивается с увеличением размера частиц. Абразивность также сильно зависит от формы частиц, поскольку протяженные бороздки были выявлены на образцах, чистка которых проводилась с использованием паст с угловатыми частицами стекла с острыми краями, что повышало абразивные свойства пасты в отношении эмали.
a. GSK, Weybridge UK.
b. Prince Minerals Ltd., Stokeon-Trent, UK.
c. Sigma–Aldrich, Gillingham, UK.
d. Lenton, Hope Valley, UK.
e. X'Pert PRO MPD, PANalytical, Cambridge, UK;
f. Glen Creston London, UK.
g. Pascall Engineering Crawley Sussex, UK.
h. Endecotts Ltd., London, UK.
i. Kemet International Ltd, Maidstone, UK.
j. Malvern Instruments Ltd, Malvern, UK.
k. JEOL, Tokyo, Japan.
l. Incise Dental Scanners, Renishaw Gloucestershire, UK.
m. Medical Physics Dept Unversity College London London, UK.
Список литературы:
1. Du MQ, Tai BJ, Jiang H, Zhong JP, Greenspan DC, et al. Efficacy of dentifrice containing bioactive glass (NovaMin®) on dentin hypersensitivity. J Dent Res (Sp Is A) 2003;83:1546.
2. Greenspan DC, Clark A, La Torre GP. In vitro antimicrobial properties of a bioactive glass (NovaMin®) containing dentifrice. J Dent Res 2004; 82:1586.
3. Gjorgievska E, Nicholson JW. Prevention of enamel demineralization after tooth bleaching by bioactive glass incorporated into toothpaste. Aust Dent J 2011;56:193-200.
4. Layer TM. Development of a fluoridated, daily-use toothpaste containing NovaMin technology for the treatment of dentin hypersensitivity. J Clin Dent 2011;22:59-61.
5. Gendreau L, Barlow AP, Mason SC. Overview of the clinical evidence for the use of NovaMin in providing relief from the pain of dentin hypersensitivity. J Clin Dent 2011;22:90-95.
6. Earl JS, Leary RK, Muller KH, Langford RM, Greenspan DC. Physical and chemical characterization of dentin surface following treatment with NovaMin technology. J Clin Dent 2011;22:62-67.
7. Earl JS, Ward MB, Langford RM. Investigation of dentinal tubule occlusion using FIB-SEM milling and EDX. J Clin Dent 2010;21:37-41.
8. Parkinson CR, Willson RJ. A comparative in vitro study investigating the occlusion and mineralization properties of commercial toothpastes in a four-day dentin disc model. J Clin Dent 2011; 22:74-82.
9. Wang Z, Jiang T, Sauro S, Pashley DH, Toledano M, et al. The dentine remineralization activity of a desensitizing bioactive glass-containing toothpaste: An in vitro study. Aust Dent J 2011;56:372-381.
10. West NX, Macdonald E, Jones SB, Claydon NCA, Hughes N, et al. Randomized in situ clinical study comparing the ability of two new desensitizing toothpaste technologies to occlude patent dentin tubules. J Clin Dent 2011; 22 82-89.
11. Tai BJ, Bian Z, Jiang H, Greenspan DC, Zhong J, et al. Anti-gingivitis ef- fect of a dentifrice containing bioactive glass (NovaMin) particulate. J Clin
Periodontol 2006;33:86-91.
12. Efflandt SE, Magne P, Douglas WH, Francis LF. Interaction between bioactive glasses and human dentin. J Mater Sci 2002;13:557-565.
13. Wang Z, Jiang T, Sauro S, Pashley DH, Toledano M, et al. The dentine remineralization activity of a desensitizing bioactive glass-containing toothpaste: An in vitro study. Aust Dent J 2011;56:372-381.
14. Gillam DG, Tang JY, Mordan NJ, Newman HN. The effects of a novel Bioglass® 27 dentifrice on dentine sensitivity: A scanning electron microscopy investigation. J Oral Rehabil 2002; 29:305-313.
15. Gendreau L, Barlow APS, Mason SC. Overview of the clinical evidence for the use of NovaMin® in providing relief from the pain of dentin hypersensitivity. J Clin Dent 2011; 22:90-95.
16. Burwell AK, Litkowski LJ, Greenspan DC. Calcium sodium phosphosilicate (NovaMin): Remineralization potential. Adv Dent Res 2009;21:35-39.
17. Litkowski LJ, Quinlan KB, McDonald NJ. Calcium sodium phosphosilicate (NovaMin): Remineralization potential. J Dent Res 1998;77(Suppl. 1):199.
18. Wang ZJ, Sa Y, Sauro S, Chen H, Xing WZ, et al. Effect of desensitising toothpastes on dentinal tubule occlusion: A dentine permeability measure-ment and SEM in vitro study. J Dent 2010;38:400-410.
19. Pradeep AR, Sharma A. Comparison of clinical efficacy of a dentifrice containing calcium sodium phosphosilicate to a dentifrice containing potassium nitrate and to a placebo on dentinal hypersensitivity: A randomized clinical trial. J Periodontol 2010;81:1167-1173.
20. Cook RJ, Watson TF, Hench LL, Thompson ID. Use of bioactive glass. US2008/0176190.
21. Addy M. Tooth brushing tooth wear and dentine hypersensitivity- are they associated? Int Nat Dent J 2005;55:261-267.
22. Gillam DG, Orchardson R. Advances in the treatment of root dentine sensitivity, mechanisms and treatment principles. Endod Topics 2006;13:13-33.
23. Cuy JL, Mann AB, Livi KJ, Teaford MF, Weihs TP. Nanoindentation mapping of the mechanical properties of human molar tooth enamel. Arch Oral Biol 2002;47:281-291.
24. Jeng YR, Lin TT, Hsu HM, Chang HJ, Shiekh DB. Human enamel rod presents anisotropic nanotribological properties. J Mech Behav Biomed Mater 2011;4:515-522.
25. Muscle DP, Burwell KA, La Torre G. Composition and methods for enhancing fluoride uptake using bioactive glass. US 2009/0324516.
26. British Standards Institution. Dentistry-toothpastes - Requirements, test methods and marking, BS EN ISO 11609; 1998.
27. Mneimne M, Hill RG, Bushby AJ, Brauer DS. High phosphate content 1 significantly increases apatite formation of fluoride-containing bioactive glasses. Acta Biomater 2011;7:1827-1834.
28. Brauer DS, Karpukhina N, O'Donnell MD, Law RV, Hill RG. Fluoride-containing bioactive glasses: Effect of glass design and structure on degradation, pH and apatite formation in simulated body fluid. Acta Biomater 2010;6:3275-3282.
29. Diamanti I, Loeltsi-Kounari H, Mamai_Homata E, Vougiouklakis G. In vitro evaluation of fluoride and calcium phospho-silicate toothpastes on root dentine caries lesions. J Dent 2011;39:619-628.
30. Kaya E, Hogg R, Kumar SR. Particle shape modification during comminution. Kona 2002; 20:188-194.